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探針合成實(shí)驗(yàn)服務(wù)

探針合成實(shí)驗(yàn)服務(wù)

產(chǎn)品型號:

所屬分類:分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

產(chǎn)品時(shí)間:2024-08-30

簡要描述:[探針合成實(shí)驗(yàn)服務(wù)]慢病毒,腺病毒,RNAI類, 分子生物實(shí)驗(yàn),病理實(shí)驗(yàn),免疫學(xué)實(shí)驗(yàn),細(xì)胞實(shí)驗(yàn),動(dòng)物實(shí)驗(yàn),蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn),芯片類實(shí)驗(yàn),并為廣大客戶朋友們提供課題設(shè)計(jì)指導(dǎo)、基金申請指導(dǎo)、SCI. 核心期刊等服務(wù)。

詳細(xì)說明:

探針合成實(shí)驗(yàn)服務(wù)



探針是- -小段單鏈DNA或者RNA--片段(大約是20到500 bp), 用于檢測與其互補(bǔ)的核酸序列。雙鏈DNA加熱變性成為單鏈,隨后用放射性同位素(通常用磷-32)、螢光染料或者酶 (如辣根過氧化物酶)標(biāo)記成為探針。


實(shí)驗(yàn)材料

基因


試劑、試

劑盒


轉(zhuǎn)錄緩沖液DTT RNA酶抑制劑CTP ATP S-UTP乙酸銨乙醇


儀器、耗


水溶鍋、離心機(jī)、培養(yǎng)箱、烘箱











實(shí)驗(yàn)步驟

1.在一個(gè)含SP6. T3或T7啟動(dòng)子的載體中,插入目的基因。在編碼序列下游酶切使質(zhì)粒呈線

性。DNAL以酚/氨0仿抽提, 乙醇沉淀,70%乙醇洗后晾干。以無菌水重溶沉淀至1 ug/ul。

2.室溫配置如下反應(yīng)混合液(總體積20μl) :

(1) 4.0 ul 5x轉(zhuǎn)錄緩)沖液

(2) 0.2 ul 1 mol/ DTT

(3) 60 U RNA酶抑制劑

(4) 1.0 ul三種10 mmol/l NTP中的每-種

(5) 1.0 ul 1 ug/ul酶切DNA

(6) 10.0μ ζ[35s] UTP

(7) 16 U SP6或T7 RNA聚合酶

(8) 37*C溫育30 min,再加16 U聚合酶并于37 °C溫育40 min。

3.在反應(yīng)混合液中加入: 60 U RNA酶抑制劑,20 μl 10 mg/ml的載體RNA和1.0μl酶1,于37°C溫育10 min以除去摸板。

4.往反應(yīng)混合液加入以下液體: 0.8 ul 1 mol/l DTT. 63 μul 無菌水和10 μI3 mol/l乙酸鈉,取出1 ul測定其cpm/ul值。

5.加36.4μ7.5 molM的乙酸銨于反應(yīng)混合液(終濃度2 mol/)加50~100 ug tRNA載體和272ul冷無水乙醇,置干冰上沉淀10 min,以冷70%乙醇洗沉淀,晾干,需要的話可重復(fù)此步。以100μl 10 mmol/l DTT重溶DNA沉淀。


6.確定其cpm/μl值, 并計(jì)算摻入百分比,核糖核酸探針應(yīng)于2~3天內(nèi)使用。

(70%到90%的標(biāo)記摻入,結(jié)果可得70~90 ng標(biāo)記的RNA)





收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:

歡迎咨詢詳談,我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。

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