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土壤脫氫酶試劑盒檢測說明書
更新時間:2021-05-09 點擊量:1554

規(guī)格:100 /48 

土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)試劑盒說明書

微量法

注意:正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內(nèi)活性微生物量以及其對有機物的降解活性,可以作為土壤微生物的降解性能指標(biāo)。

測定原理:

氫受體 2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC) 在細(xì)胞呼吸過程中接受氫以后,被還原為三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF,TF 呈現(xiàn)紅色,在波長 485nm 處有最大吸收峰,采用分光光度法于 485nm 測定其吸光值,即得土壤脫氫酶活性。

自備實驗儀器及用品:

篩子、天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、冰、蒸餾水、丙酮(不允許快遞,請用戶自備。

試劑的組成和配制:

試劑一:粉劑×1 瓶,使用前加 5mL 水溶解,4℃避光保存(盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。試劑二:液體 20mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:丙酮,自備。

樣品處理:

1. 土壤樣品:準(zhǔn)確稱取過 40 目篩的新鮮土壤樣品約 0.1g以保證 TTC 與土壤顆粒充分接觸

2. 污泥樣品:污泥用蒸餾水洗滌,10000g,25℃,離心 10min,棄上清,反復(fù) 3-4 次。

測定步驟和操作表:

1、分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 0min,調(diào)節(jié)波長至 485nm。

2、操作表

 

對照管

測定管

樣品(g)

0.05

0.05

試劑一(mL)

 

0.1

試劑二(mL)

0.2

0.1

置于 EP 管中,充分混勻,37℃,暗培養(yǎng) 6h,取出后立即冰浴 5min

試劑三(mL)

0.1

0.1

反復(fù)震蕩數(shù)次,37℃保溫 10min,10000g,4℃,離心 5min,取 200μL 上清于微量石英比色皿/96 孔板,對照管調(diào)零,測定 A 485 。

脫氫酶活力計算:

酶活單位定義:

37℃時,每克樣品每小時使反應(yīng)體系 OD 值每增加 0.01 為一個酶活單位。計算公式:脫氫酶活性(U/g)=A 485 ÷0.01÷T÷W= 16.67×A 485 ÷W

T:培養(yǎng)時間,h;W:樣品質(zhì)量,g

注意事項:

1. 配制好的試劑一避光保存于 4℃,最好在一周內(nèi)使用,若出現(xiàn)紅色,則不能使用。

2. 試劑三易揮發(fā),有毒,為了您的健康,請穿實驗服,戴口zhao,戴乳膠手套操作。

3. 反應(yīng)完成后立即冰浴以終止反應(yīng),并去除干凈殘留的反應(yīng)液。

4. 如果測定出來的吸光值較大,減少樣品用量再進(jìn)行測定。

5. 試劑盒 2-8℃保存。

 

實驗代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費代檢測

CCK8檢測

HE染色

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化IHC染色

熒光定量PCR

動物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測

免疫熒光染色

激光共聚焦

DNA甲基化實驗

石蠟/冰凍切片

透射電鏡服務(wù)

掃描電鏡實驗

蛋白雙向(2-D)

動物實驗

免疫共沉淀

原位雜交(FIsh

蛋白質(zhì)純化

分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

組蛋白甲基化磷酸化乙?;?/a>

 

蛋白雙向2D-WB

 

藥理毒理動物實驗

 

番紅O固綠染色

明膠酶譜MMP

酶活性檢測

動物造模/模型實驗服務(wù)

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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