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021-65232515
全血/組織/細胞基因組DNA快速提取試劑盒
Rapid Genomic DNA Kit
試劑盒組成 | 保存 | DL110-01 100 次 | DL110-02 200 次 |
RNaseA(10mg/ml) | 室溫 | 300μl×2 | 300μl×4 |
裂解液 TL | 室溫 | 25ml | 50ml |
緩沖液 BB | 室溫 | 50ml | 100ml |
結合液 CB | 室溫 | 30ml | 60ml |
抑制物去除液 IR | 室溫 | 50ml | 100ml |
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| 25ml | 25ml×2 |
漂洗液 WB 室溫 第-次使用前按說明加指-*定量乙醇 | |||
洗脫緩沖液 EB | 室溫 | 15ml | 15ml ×2 |
蛋白酶 K(20mg/ml) | -20℃ | 1ml×2 | 1ml×4 |
吸附柱 AC | 室溫 | 100 個 | 200 個 |
收集管(2ml) | 室溫 | 100 個 | 200 個 |
保存條件:本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果。RnaseA、蛋白酶 K 可室溫運輸,建議-20℃長期保存。
產品介紹:
*的結合液/蛋白酶 K 迅速裂解細胞和滅活細胞內核酸酶,然后基因組DNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,抑制物去除液和漂洗液將細胞代謝物、蛋白等雜質去除,后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA 從硅基質膜上洗脫。
產品特點:
1.重復性好:離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小??朔藝a試劑盒膜質量不穩(wěn)定的弊端。
2 提取純度高,OD260/OD280 典型的比值達1.7~1.9,可直接用于PCR,Southern-blot
和各種酶切反應。
3. 簡單快速,一小時內即可獲得超純的基因組DNA
4. 廣 泛:適用于血液、多種動物細胞和動物組織等。
注意事項:
1. 結合液CB 或者抑制物去除液IR低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀,可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解,恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2. 避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發(fā)、氧化、pH 值變化。
3. 結合液CB和抑制物去除液IR 中含有刺激性化合物,操作時要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時,要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
4. 洗脫液EB不含有螯合劑EDTA,不影響下游酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫, 但應該確保批pH 大于7.5,pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA 應該保存在-20℃。DNA 如果需要長期保存,可以用 TE 緩沖液洗脫(10mM Tris-HCl, 1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA 可能影響下游酶切反應,使用時可以適當稀釋。
自備試劑:無水乙醇
操作步驟:
提示:第-次使用前請先在漂洗液WB 中加入指-*定量無水乙醇,充分混勻,加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇,以免多次加入!
1. 處理材料
a. 血液
如提取材料為血液,可直接使用220μl新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液,不足220µl用緩沖液BB補足220µl,振蕩混勻。
b. 如果處理血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低級生物的抗凝血液,其紅細胞為有核細胞,因此處理量 5-20μl,可加緩沖液 BB 補足 220μl 后進行下面的裂解步驟。
c. 貼壁培養(yǎng)的細胞應先處理為細胞懸液,然后 10,000rpm 離心1min,棄上清,加 220μl緩沖液BB,振蕩至*懸浮;
d. 動物組織(脾組織用量應少 10mg)應先打碎處理為細胞懸液,然后10,000rpm離心1 min,倒盡上清,加220μl 緩沖液BB,振蕩至*懸浮。
2. 提取組織培養(yǎng)細胞和動物組織DNA時為清除RNA,加入5µl RNase A(10mg/ml),振蕩混勻,室溫放置5min。
3. 加入20µl蛋白酶K,振蕩混勻,置于55℃水浴中消化處理。
a. 提取血液基因組時,只需加入Proteinase K混勻,即可繼續(xù)進行下一步。
b. 提取細胞基因組時,只需加入Proteinase K混勻,即可繼續(xù)進行下一步。
c. 提取組織基因組時,加入Proteinase K混勻后,在56℃放置,直至組織溶解,簡短離心以去除管蓋內壁的水珠,再進行下一步驟。
5.加入結合液CB并充分混勻后,置于70℃水浴10 min,等溶液變清亮,12,000rpm短離心以去 除管蓋內壁的水珠。
注意:加入緩沖液GB時可能會產生白色沉淀,一般70℃放置時會消失,不會影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮,說明細胞裂解不*,可能導致提取DNA量少和提取出的DNA 不純。當血液體積≤200μl且沒有采用紅細胞裂解處理,或是樣本儲存條件不佳,水浴后顏 色可能為深褐色,注意溶液中沒有團塊等沉淀
6.加入220µl的無水乙醇,充分振蕩混勻15 sec,此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀,簡短離心以去 除管蓋內壁的水珠。
7.將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中),12,000rpm 離心30 sec,倒掉廢液,將吸附柱AC放回收集管中。
8.加入500µl抑制物去除劑IR,12,000rpm離心1 min。倒掉收集管中的濾液。并將離心柱放回收集管中。
9.加入500µl 漂洗液WB,12,000rpm離心30 sec。(使用前請檢查是否已經加入無水乙醇)倒掉收集管中的濾液。并將離心柱放回收集管中。
10. 重復步驟9的操作。
11. 將吸附柱AC柱放回收集管中,12,000rpm離心2 min,倒掉廢液。將AC吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘,以*晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
實驗代做服務:
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