99中文字幕亚洲一区二区-国产真实乱免费高清视频-亚洲变态另类调教久久久-玖久综合玖久综合人人

網(wǎng)站首頁(yè)技術(shù)中心 > RIPA裂解液(強(qiáng))說(shuō)明書(shū)
產(chǎn)品目錄
RIPA裂解液(強(qiáng))說(shuō)明書(shū)
更新時(shí)間:2020-09-23 點(diǎn)擊量:5121

RIPA裂解液(強(qiáng))說(shuō)明書(shū)

RIPA Lysis Buffer

目錄號(hào):K2333

保存條件:4℃保存。

組分說(shuō)明

 

                            Cat. No.         K2333

                             Volume        100 ml

 

 本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

  RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的組織以及細(xì)胞快速裂解液,主要用于從動(dòng)物組織和哺乳

動(dòng)物細(xì)胞中抽取可溶性蛋白,可用于裂解貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。按照其裂解液的強(qiáng)度

可以分為強(qiáng)、中、弱三類(lèi),具體特點(diǎn)和差異請(qǐng)參考附表2,可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇相應(yīng)產(chǎn)

品。RIPA裂解液(強(qiáng))可以有效提取細(xì)胞核、細(xì)胞膜和胞漿蛋白,提取的蛋白可應(yīng)用

于蛋白定量、Western Blot、IP等檢測(cè)分析。

  RIPA裂解液(強(qiáng))的主要成分為50mM Tris(pH 7.4),150mM NaCl,1%Triton

X-100,1%  sodium  deoxycholate,0.1%  SDS以及sodium  orthovanadate,sodium

fluoride,EDTA,leupeptin等多種抑制劑,可有效抑制蛋白降解。

 

注意事項(xiàng)

 

1.為防止蛋白降解,所有的操作盡量在冰上進(jìn)行。

2.使用RIPA裂解液得到的蛋白樣品,可采用BCA法進(jìn)行蛋白定量,以測(cè)定蛋白濃度。

   產(chǎn)品可單獨(dú)向本公司訂購(gòu),如:K0014  BCA蛋白定量試劑盒。本品含有高濃度的

   去垢劑,不能用Bradford法進(jìn)行蛋白定量。

3.建議在使用RIPA裂解液前,向溶液中加入蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,以防止蛋

   白降解,或保持蛋白的磷酸化狀態(tài)。產(chǎn)品可單獨(dú)向本公司訂購(gòu),如:K2200 蛋白酶抑制劑混合物,K2383 磷酸酶抑制劑混合物。

4.若需獲得更高濃度的蛋白,應(yīng)減少哺乳動(dòng)物蛋白抽提試劑的使用量。

5.對(duì)于培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞,推薦先使用常規(guī)方法消化細(xì)胞,再參考懸浮細(xì)胞蛋白提

   取步驟操作。

6.對(duì)于離心獲得的細(xì)胞,若不確定細(xì)胞體積,可根據(jù)細(xì)胞數(shù)量計(jì)算RIPA裂解液的使用

   量。如5×106個(gè)Hela細(xì)胞約需加入500 μl RIPA裂解液,以此類(lèi)推。

 

操作步驟

  I  細(xì)胞樣品

 · 貼壁細(xì)胞蛋白抽提

1.小心傾去貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液。

2.可選步驟:若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的物質(zhì),請(qǐng)先使用預(yù)冷的

   PBS漂洗細(xì)胞。

 

3.加入適量RIPA裂解液(使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑),試劑使用量請(qǐng)參考

   附表1,在冰上用槍頭吹打貼壁細(xì)胞。

 

表 1   貼壁細(xì)胞RIPA 裂解液使用量推薦表

細(xì)胞培養(yǎng)板類(lèi)型或培養(yǎng)面積                         RIPA  裂解液使用量

                     100 mm*                         500-1,000 µl

                      60 mm                          250-500 µl

                    6 孔培養(yǎng)板                          200-400 µl /孔

                   24 孔培養(yǎng)板                          100-200 µl /孔

                   96 孔培養(yǎng)板                          50-100 µl /孔

 

 * 對(duì)于100 mm培養(yǎng)板培養(yǎng)的107個(gè)細(xì)胞 (50 mg)可裂解獲得約3 mg總蛋白(細(xì)胞類(lèi)型不同略有差異)。

 

4.將裂解液轉(zhuǎn)移至新的離心管中,冰上孵育20分鐘,使細(xì)胞充分裂解。

5.14,000×g離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中,進(jìn)行下一步分析。

 

 · 懸浮細(xì)胞蛋白提取

1.懸浮細(xì)胞2,500×g,離心5分鐘,棄去上清。

2.可選步驟:若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的物質(zhì),請(qǐng)使用PBS漂洗

   細(xì)胞。漂洗后的細(xì)胞懸浮液2,500×g離心5分鐘,棄去上清。

3.加入適量RIPA裂解液(使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑),每5×106細(xì)胞加入約

   200-500 µl RIPA裂解液,吹打均勻。

4.冰上放置20分鐘,使細(xì)胞充分裂解。

5.14,000×g離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中,進(jìn)行下一步分析。

  II  組織樣品

1.取適當(dāng)?shù)腞IPA裂解液,在使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑。

2.稱量實(shí)驗(yàn)組織的重量,按照1:10(g/ml)的比例加入RIPA裂解液后將組織剪成細(xì)

   小碎片,用電動(dòng)勻漿器勻漿處理。若需要濃縮的蛋白提取物,可適當(dāng)減少組織蛋白

   抽提試劑使用量。

3.冰上孵育20分鐘,使細(xì)胞充分裂解。

4.14,000×g 離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中,進(jìn)行下一步分析。

  注:RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中可能會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,屬正?,F(xiàn)象。該透明膠狀物為基因組。

 

 相關(guān)產(chǎn)品信息

 

            目錄號(hào)                 產(chǎn)品名稱

            K2333              RIPA裂解液(強(qiáng))

            K2334              RIPA裂解液(中)

            K2335              RIPA裂解液(弱)

            K2336              RIPA裂解液(強(qiáng)中弱套裝)

            K2337              SDS裂解液

            K0002/K0889       哺乳動(dòng)物蛋白抽提試劑/哺乳動(dòng)物蛋白抽提試劑盒

            K0004/K0891       組織蛋白抽提試劑/組織蛋白抽提試劑盒

            K0199B             Nc-細(xì)胞核/漿蛋白抽提試劑盒

            K2200              蛋白酶抑制劑混合物

            K2383              蛋白磷酸酶抑制劑混合物

            K0014              BCA蛋白定量試劑盒

            K0022              SDS-PAGE凝膠制備試劑盒

            K0023              ProteinShow-G250蛋白快速染色試劑

 

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

CCK8檢測(cè)

HE染色

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化IHC染色

熒光定量PCR

動(dòng)物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測(cè)

免疫熒光染色

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

石蠟/冰凍切片

透射電鏡服務(wù)

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

蛋白雙向(2-D)

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

免疫共沉淀

原位雜交(FIsh)

蛋白質(zhì)純化

分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

組蛋白甲基化磷酸化乙酰化

 

蛋白雙向2D-WB

 

藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

番紅O固綠染色

明膠酶譜MMP

酶活性檢測(cè)

動(dòng)物造模/模型實(shí)驗(yàn)服務(wù)

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

亚洲五月婷婷综合激情| 日韩免费电影一区二区三区| 日本伦精品一区二区三区免费| 日韩电影在线观看视频一区二区| 日本不卡不二三区在线看| 亚洲午夜精品影院高清| 亚洲高清一区二区高清| 免费在线观看不卡视频| 日本韩国精品免费视频| 国产内射一级一片内射高清| 国产精品毛片一区二区三| 亚洲欧美日韩永久在线| 日韩最新人妻在线不卡| 日韩精品在线观看资源| 国产农村一区二区三区| 日韩精品电影亚洲一区| 亚洲精品一区二区乱码| 国产精品国产三级国产专区不卡| 国产精品久久久久久老熟女| 97精品国产97久久久久久毛片| 国产福利91精品张津瑜 | 亚洲国产性夜夜综合另类| 麻豆精品国产三级在线观看 | 国产在线播放不卡视频| 欧美日韩亚洲国产综合在线观看| 国产男女猛烈无遮挡免费视频| 成人18禁h黄在线看免费| 女人露出尿口让男人捅爽| 国产精品久久久久久亚洲情欲| av 一区 二区 三区| 午夜影院在线免费观看五分钟| 精品国产综合久久久久久| 在线国产日本欧美精品| 午夜影院在线免费观看三区| 久久久亚洲美女高潮| 国产欧洲精品亚洲午夜拍精品| 日本性感熟女少妇一区二区三区 | 日本视频天堂在线不卡| 精品啪啪视频一区二区三区| 丰满人妻少妇精品一区二区三区| 国产精品综合色国产亚洲欧|